告別養(yǎng)殖煩惱，畜日安來(lái)助力

農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司關(guān)于印發(fā)《國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料采集保存工作實(shí)施方案》的通知

 
農(nóng)種畜函〔2019〕14號(hào)

 
各省、自治區(qū)、直轄市農(nóng)業(yè)農(nóng)村（農(nóng)牧）、畜牧獸醫(yī)廳（委、局），新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、黑龍江省農(nóng)墾總局，各有關(guān)單位:
為貫徹落實(shí)《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃（2018-2022年）》《全國(guó)畜禽遺傳資源保護(hù)和利用“十三五”規(guī)劃》，切實(shí)加強(qiáng)我國(guó)地方豬遺傳資源保護(hù)，有效應(yīng)對(duì)非洲豬瘟疫情的嚴(yán)重威脅，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司決定開(kāi)展國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料采集保存工作?，F(xiàn)將《國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料采集保存工作實(shí)施方案》印發(fā)你們，請(qǐng)按照方案要求，認(rèn)真抓好相關(guān)任務(wù)措施落實(shí)。如有不可抗力等有關(guān)情況，及時(shí)向我司畜禽種業(yè)處、全國(guó)畜牧總站反饋。
聯(lián)系人及電話：
種業(yè)管理司畜禽種業(yè)處 周曉鵬 010—59193287
全國(guó)畜牧總站畜禽資源處 張桂香 010—59194625
 
 
 

　　　　　　　      農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司
　　　　　　　　       2019年6月17日

 
 

國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料采集保存工作實(shí)施方案

 
為貫徹落實(shí)《鄉(xiāng)村振興戰(zhàn)略規(guī)劃（2018-2022年）》《全國(guó)畜禽遺傳資源保護(hù)和利用“十三五”規(guī)劃》，有效應(yīng)對(duì)非洲豬瘟疫情對(duì)地方豬遺傳資源的嚴(yán)重威脅，加快國(guó)家級(jí)地方豬品種遺傳材料采集和保存，提高地方豬遺傳資源保護(hù)能力，維護(hù)地方豬遺傳資源的系統(tǒng)性和完整性，制定本方案。
一、目的意義
我國(guó)地方豬遺傳資源具有抗逆性強(qiáng)、耐粗飼、繁殖率高、肉質(zhì)優(yōu)良等特性，利用地方豬遺傳材料開(kāi)展育種工作，有利于提高生豬種業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力，發(fā)展特色畜牧業(yè)，滿足城鄉(xiāng)居民多樣化、高品質(zhì)消費(fèi)需求。當(dāng)前非洲豬瘟防控形勢(shì)復(fù)雜嚴(yán)峻，對(duì)地方豬遺傳資源安全造成重大威脅。采用超低溫冷凍技術(shù)，采集保存我國(guó)地方豬品種的DNA、精液、體細(xì)胞及腸道菌群等遺傳材料，是應(yīng)對(duì)非洲豬瘟疫情威脅，豐富地方豬品種保護(hù)手段，完善家畜遺傳資源保種體系，推動(dòng)生豬種業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的重要途徑。
二、主要任務(wù)
（一）采集制作遺傳材料
采集制作61個(gè)國(guó)家級(jí)保種場(chǎng)、保護(hù)區(qū)內(nèi)國(guó)家級(jí)地方豬精液、體細(xì)胞等遺傳材料（見(jiàn)附件1）。每個(gè)地方豬品種收集不少于120份耳組織樣（>2克/份）；每個(gè)品種制作冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細(xì)管）或者7500劑（0.5mL細(xì)管）；每個(gè)品種制作體細(xì)胞系不少于222份（每份1mL）：每個(gè)品種收集不少于120份健康后備豬新鮮糞便樣品。
（二）構(gòu)建國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫(kù)
在采集遺傳材料的同時(shí)，收集供體出生日期、三代以內(nèi)系譜信息、性能測(cè)定等表型記錄數(shù)據(jù)，構(gòu)建國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫(kù)。
三、任務(wù)分工
（一）全國(guó)畜牧總站。具體組織項(xiàng)目實(shí)施，制定遺傳材料采集制作和驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)，在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)等單位協(xié)助下開(kāi)展技術(shù)培訓(xùn)，進(jìn)行督導(dǎo)檢查與驗(yàn)收，集中保存遺傳材料，收集匯總記錄檔案。指導(dǎo)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)構(gòu)建采集遺傳材料信息數(shù)據(jù)庫(kù)，做好數(shù)據(jù)庫(kù)運(yùn)行和維護(hù)等工作。
（二）保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）。協(xié)助開(kāi)展遺傳材料采集和制作，以及病毒、細(xì)菌檢測(cè)等工作，協(xié)助提供供體三代以內(nèi)系譜（需簽字蓋章）、生產(chǎn)性能測(cè)定等數(shù)據(jù)以及正面、側(cè)面數(shù)碼照片各1張。
（三）遺傳材料制作單位。江西農(nóng)業(yè)大學(xué)、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)等遺傳材料采集制作單位，與全國(guó)畜牧總站簽訂安全和保密承諾書，采集制作遺傳材料并開(kāi)展病毒、細(xì)菌等檢測(cè)（見(jiàn)附件2、3），提供檢測(cè)報(bào)告或者相關(guān)證明材料，填報(bào)相關(guān)數(shù)據(jù)（見(jiàn)附件4、5、6、7），按期將制作產(chǎn)品運(yùn)送至國(guó)家級(jí)家畜基因庫(kù)保存。
江西農(nóng)業(yè)大學(xué)豬遺傳改良與養(yǎng)殖技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和云南農(nóng)業(yè)大學(xué)協(xié)助全國(guó)畜牧總站制定遺傳材料采集技術(shù)規(guī)范，進(jìn)行技術(shù)指導(dǎo)，備份采集的遺傳材料，定期向全國(guó)畜牧總站書面匯報(bào)工作進(jìn)展。
四、進(jìn)度安排
1月至6月中旬：制定實(shí)施方案，明確參與遺傳材料采集單位的任務(wù)，與有關(guān)單位簽訂購(gòu)買服務(wù)合同。
6月下旬：舉辦國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料采集制作培訓(xùn)班，全面啟動(dòng)相關(guān)工作。
6月下旬至12月：開(kāi)展遺傳材料采集制作及入庫(kù)保存工作。對(duì)各制作單位收集制作遺傳材料進(jìn)行質(zhì)量抽查。
12月底：各遺傳材料制作單位提交項(xiàng)目執(zhí)行情況等總結(jié)報(bào)告。
五、保障措施
（一）加強(qiáng)組織領(lǐng)導(dǎo)。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部種業(yè)管理司負(fù)責(zé)總體統(tǒng)籌協(xié)調(diào)，省級(jí)農(nóng)業(yè)農(nóng)村主管部門積極協(xié)調(diào)配合本轄區(qū)內(nèi)工作。全國(guó)畜牧總站牽頭組織實(shí)施，省級(jí)畜牧技術(shù)推廣機(jī)構(gòu)、遺傳材料制作單位以及國(guó)家級(jí)地方豬保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）、地縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村部門、各級(jí)種業(yè)管理系統(tǒng)等通力協(xié)作、密切配合，確保高效完成工作。
（二）規(guī)范開(kāi)展工作。加強(qiáng)對(duì)制作單位和保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）的培訓(xùn)指導(dǎo)，強(qiáng)化項(xiàng)目參與人員、遺傳材料、數(shù)據(jù)信息等管理，保證遺傳材料質(zhì)量與生物安全。明確所收集遺傳材料的所有權(quán)、使用權(quán)等，相關(guān)專項(xiàng)成果等按照國(guó)家法律法規(guī)及相關(guān)規(guī)定實(shí)現(xiàn)共享。
（三）嚴(yán)格經(jīng)費(fèi)使用管理。承擔(dān)單位應(yīng)加強(qiáng)項(xiàng)目經(jīng)費(fèi)管理，建立健全內(nèi)審機(jī)制，?？顚Ｓ?，明確經(jīng)費(fèi)預(yù)算、使用范圍，嚴(yán)格按照預(yù)算支出。項(xiàng)目組織實(shí)施單位會(huì)同地方主管部門，定期不定期對(duì)項(xiàng)目單位的資金使用情況、執(zhí)行進(jìn)度等進(jìn)行督導(dǎo)，保障項(xiàng)目規(guī)范有序?qū)嵤?br />  

附件：1.任務(wù)分工表
      2.國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測(cè)方案
3.疫病檢測(cè)清單
4.遺傳材料采集供體登記表
5.精液采集和制作記錄表
6.體細(xì)胞制作記錄表
          7.國(guó)家級(jí)家畜基因庫(kù)樣品采集記錄表

附件1           

 

    備注：1.具體任務(wù)可根據(jù)工作需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
      2.*表示該品種包括兩個(gè)或者兩個(gè)以上保護(hù)場(chǎng)（區(qū)）。

附件2
國(guó)家級(jí)地方豬遺傳材料制作及質(zhì)量檢測(cè)方案
 
一、精液冷凍保存
（一）數(shù)量要求
每個(gè)保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）的每個(gè)品種保存冷凍精液不少于15000劑（0.25mL細(xì)管）或7500劑（0.5mL細(xì)管），公豬不少于6頭，涵蓋所有家系，每個(gè)個(gè)體保存冷凍精液不少于800劑（0.25mL）或400劑（0.5mL）。
（二）供體要求
符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無(wú)血緣關(guān)系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。
（三）細(xì)管標(biāo)記及包裝
應(yīng)在細(xì)管上標(biāo)明保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）建設(shè)單位代碼、品種代碼、供體號(hào)和生產(chǎn)日期。保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）建設(shè)單位代碼用漢語(yǔ)拼音大寫首字母表示，品種代碼為該品種漢字的漢語(yǔ)拼音大寫首字母，生產(chǎn)日期按年月日次序排列，年月日各占二位數(shù)字，年度的后兩位數(shù)組成年的二位數(shù)，月、日不夠二位的，月、日前分別加“0”補(bǔ)充為二位數(shù)。
    細(xì)管標(biāo)記示例：
 
     棉塞封口端　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　封口端
CQXK為重慶畜牧科學(xué)院代碼，RCZ為榮昌豬的品種代碼，11003為該公豬號(hào)，120525為2012年5月25日的生產(chǎn)日期。
細(xì)管裝入指形管，指形管上標(biāo)記供體豬號(hào)、冷凍精液數(shù)量及生產(chǎn)日期。再用滅菌紗布袋將裝有冷凍精液的指形管包裝起來(lái)，一個(gè)滅菌紗布袋裝一頭豬的冷凍精液，并有標(biāo)簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標(biāo)簽要求標(biāo)記如下內(nèi)容：袋號(hào)、品種、供體豬號(hào)、冷凍精液數(shù)量、解凍后精子的活力。
（四）質(zhì)量檢測(cè)
1. 抽樣數(shù)量及要求
抽取總樣本量的2%進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，檢測(cè)合格率要求達(dá)到80%以上。
2. 指標(biāo)
（1）0.25mL劑型冷凍精液
每支劑量≥0.18mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)≥2.5×10⁷；每支細(xì)菌菌落數(shù)≤800個(gè)。
（2）0.5mL劑型冷凍精液
每支劑量≥0.40mL；活力≥30%；精子畸形率≤20%；每支前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)≥5.0×10⁷；每支細(xì)菌菌落數(shù)≤1600個(gè)。   
二、體細(xì)胞冷凍保存
（一）數(shù)量要求
每個(gè)保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）的每個(gè)品種公豬不少于12頭，涵蓋所有家系；母豬不少于25頭，每個(gè)個(gè)體體外培養(yǎng)原代或第1代細(xì)胞6管，每管1mL，用1.5mL或2.0mL凍存管包裝，細(xì)胞密度為1×10⁵/mL以上。
（二）供體要求
符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無(wú)血緣關(guān)系，系譜清楚；健康、必檢疾病為陰性。
（三）冷凍管標(biāo)記及包裝
凍存管上標(biāo)記編號(hào)、品種漢語(yǔ)名稱或代碼，細(xì)胞名稱或代碼、性別、培養(yǎng)代數(shù)、凍存日期。用滅菌紗布袋將凍存管包裝起來(lái)，一個(gè)滅菌紗布袋裝2-3頭豬的凍存管，并有標(biāo)簽附在紗布袋上，放入液氮中保存。紗布袋標(biāo)簽標(biāo)記品種、供體豬號(hào)、凍存管數(shù)量。
（四）質(zhì)量檢測(cè)
1.抽樣數(shù)量。抽取總樣本量的4%進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，檢測(cè)合格率要求達(dá)到70%以上。
2.指標(biāo)。細(xì)胞密度不低于1×10⁵個(gè)/mL；細(xì)胞活力80%以上；支原體檢測(cè)為陰性。
三、耳組織及基因組DNA樣冷凍保存
每個(gè)保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）每個(gè)品種采樣數(shù)量40頭（對(duì)所有公豬家系全部進(jìn)行采樣，繁殖公豬、繁殖母豬各1頭，以及后備公豬和后備母豬各1頭，且后備豬避免全同胞關(guān)系）。每個(gè)品種每個(gè)個(gè)體采集3份耳樣，每份耳組織樣不少于2克（用2 ml凍存管保存），凍存管上詳細(xì)標(biāo)注品種、耳號(hào)、性別、采樣日期、場(chǎng)地等關(guān)鍵信息。耳樣采集后立即置于液氮中保存。
四、腸道菌群冷凍保存
（一）數(shù)量要求
每個(gè)保種場(chǎng)（保護(hù)區(qū)）每個(gè)品種公豬不少于10頭，母豬不少于50頭，每頭豬采集糞便樣本2份（每份2克）。
（二）供體要求
60日齡后備豬，符合品種特性、特征；三代以內(nèi)無(wú)血緣關(guān)系，系譜清楚；近一個(gè)月沒(méi)有使用抗生素、食欲正常、體重達(dá)該品種60日齡階段標(biāo)準(zhǔn)。
（三）凍存管標(biāo)記及包裝
凍存管上標(biāo)記編號(hào)、品種漢語(yǔ)名稱、性別、采樣日齡、采樣日期。
（四）采樣要求和方法
1．采樣要求
（1）每頭豬采集新鮮糞便樣本2份（每份2克），其中一份用2.0 mL凍存管包裝后立即投入液氮或-80℃保存，另一份用5.0mL凍存管取1克新鮮糞便置于3.0 mL 含20%甘油和5%蔗糖的保護(hù)液中，液氮或-80℃保存。
（2）采樣用凍存管要求無(wú)菌，配置的含20%甘油和5%蔗糖的保護(hù)液無(wú)菌。
（3）從肛門采集新鮮糞便樣品，采樣時(shí)每頭豬要更換新的手套，防止交叉污染。
2.糞便樣品采集和保存方法
（1）采樣前準(zhǔn)備。①2 mL和5 mL凍存管高壓滅菌（或直接購(gòu)買無(wú)菌凍存管）；②配置75%乙醇；③冷凍保護(hù)液配置：以配置100mL保護(hù)液為例：無(wú)菌生理鹽水中加入20 mL甘油和5g蔗糖，混勻、定容到100 mL。④液氮或干冰；⑤其它耗材：一次性手套、紙巾等。
（2）樣品采集。①固定采樣豬，用紙巾和75%乙醇擦洗肛門；②換上一次性手套，從肛門采集糞便樣品；③從采集的糞便團(tuán)塊中，取中間部分糞便2克裝入2 mL凍存管，擦拭干凈凍存管，在管壁標(biāo)記耳號(hào)、性別、采樣如期和年齡，立即投入液氮中；④另取中間部分糞便1克裝入放有3 mL保護(hù)液的凍存管中，混勻，在管壁標(biāo)記耳號(hào)、性別、采樣如期和年齡，投入液氮中。⑤在液氮中保存，或送至實(shí)驗(yàn)室后轉(zhuǎn)移到-80℃。⑥樣品運(yùn)輸郵寄可用干冰。

附件3

 備注：1-5為必檢測(cè)項(xiàng)目，6-17為選測(cè)項(xiàng)目。

附件4   

有系譜者不用填寫，來(lái)源：填寫?。ㄊ校?、縣、鄉(xiāng)、村；親緣關(guān)系：填寫與收集了遺傳物質(zhì)的其他個(gè)體的親緣關(guān)系，如和“XXX”“父子”或“同父”“同母”...有親緣關(guān)系但不清楚的填寫“有”，沒(méi)有親緣關(guān)系填寫“無(wú)”，親緣關(guān)系不清楚填寫“不清楚”。        

全國(guó)畜牧總站國(guó)家家畜基因庫(kù)制

附件5

附件6
體細(xì)胞制作記錄表
保種場(chǎng)（區(qū)）名稱：                     
品種：                                  共  頁(yè)     第   頁(yè)

序號(hào)	樣品號(hào)	耳號(hào)	性別	冷凍 日期	培養(yǎng)代數(shù)	數(shù)量（份）	密度 億/mL	制作人	備注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
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12
13
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全國(guó)畜牧總站國(guó)家家畜基因庫(kù)制
 
附件7
 
國(guó)家家畜基因庫(kù)
 
樣品采集記錄表
 
 
 
品種名稱：
保種場(chǎng)（區(qū)）：
采樣量：
采樣人員：
采樣時(shí)間：
 
 
 
 

序號(hào)	采樣編號(hào)	耳號(hào)	類別	樣品類型	家系編號(hào)	備注
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
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注：1. 采樣編號(hào)：品種代碼（三位）和順序號(hào)（二位），其中品種代碼為該品種漢字的漢語(yǔ)拼音大寫首字母，順序號(hào)不足位數(shù)用“0”補(bǔ)齊。
    2. 類別：指能繁母豬、種公豬、后備公豬或后備母豬。
3. 樣品類型：指耳組織或血液。